لینک دانلود و خرید پایین توضیحات
فرمت فایل word و قابل ویرایش و پرینت
تعداد صفحات: 2
استخراج dna از بافت گیاهی
--------------------------------------------------------------------------------
روش کلی استخراج ماده وراثتی جهت انجام فعالیت های پژوهشی و اصلاحی در گیاهان به شرح زیر میباشد.
TESS (1- اول بافر
کد:
A: Tris NaoH( or HCl )………..100 mM
B: EDTA………………………..1mM
C: NaCl…………………………50mM
D: SDS…………………………2%2- حدود 3 گرم بافت برگ گیاه در ازت مایع با هاون خرد شود.
3- مقداری از بافت خرد شده (حدود 2/0 گرم ) را داخل تیوب 5/1 سی سی ریخته و به آن ( 1/0 تا 3/0 حجم تیوب ) اضافه می کنیم. TESS 500 میکرولیتر بافر استخراج
4- به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق روی شیکر به هم بخورد.
5- بعد از هم خوردن به مدت 10 دقیقه به آن 150 میکرولیتر استات پتاسیم 5 مولار اضافه می کنیم و دوباره روی شیکر به مدت 5 دقیقه قرار می دهیم (در دمای اتاق(.
6- بعد از به هم خوردن سانتریفیوژ تیوبها به مدت 4 دقیقه و با سرعت 7000 دور انجام می گیرد.
7- بعد از سانتریفیوژ، فاز رویی تیوپ را به تیوپ جدید منتقل کرده و رسوب بافت گیاهی را از آن حذف می کنیم.
8- به فاز رویی سانتریفیوژ در تیوپ جدید، هم اندازه حجم خود آن الکل 96% اضافه کرده و به آرام چند بار به هم زده تا باهم مخلوط شده و بعد به مدت 20 دقیقه در فریزر 20- قرار می دهیم.
9- در مرحله بعد، از فریزر بیرون آورده و سانتریفیوژ دوم آنرا با 14000 دور و مدت 6 دقیقه انجام می دهیم.
در ته تیوپ را باDNA10- بعد از اتمام سانتریفیوژ فاز رویی را سریعا" خالی کرده و پلیت اتانول 70% شستشو می دهیم ( هر بار با 100 میکرو لیتر(
11- بعد از شستشو سر تیوبها را به مدت نیم ساعت باز گذاشته تا خشک شوند و بعد به هر یا آب مقطر اضافه می کنیم.TE کدام از آنها 100 میکرولیتر بافر
دانلود تحقیق کامل درباره استخراج dna از بافت گیاهی