85 صفحه ورد شامل
(1-2-2) مکانیسم اثر همسایگی پرتوی.. 5
(1-2-2-1) نقش GJIC در انتقال پیام های همسایگی.. 6
(1-2-2-2) متابولیسم های اکسیداسیون.. 6
(1-2-2-3) مسیر مولکولی MAPK ، سایتوکین ها و عوامل رشد.. 7
(1-2-2-5) تغییرات مولکولی ایجاد شده در سلول به دنبال تابش پرتوی یونیزان.. 10
(1-2-2-6) تغییرات بیان ژنی.. 11
(1-3-1) پرتودرمانی و اثر همسایگی.. 13
(1-4) حفاظت پرتوی و اثر همسایگی.. 15
(2-1) نوع سلول مورد بررسی.. 19
(2-1-1) مطالعاتی که در آنها کاهش اثر همسایگی با افزایش دز مشاهده شده است. 20
(2-1-2) نقش تغییر غلظت محیط کشت تابشی در ایجاد اثر همسایگی پرتوی.. 20
(3-1-1-1) رده سلولی QU-DB.. 25
(3-1-1-4) نحوه تهیه محیط کشت... 25
(3-1-1-5) نحوه تهیه محیط کشتDMEM... 26
(3-1-1-6) (FBS) Fetal Bovine Serum... 26
(3-1-1-13) دی متیل سولفوکساید(DMSO). 27
(3-1-1-14) فلاسک کشت سلولی.. 27
(3-1-2-6) سیستم های خنک کننده شامل یخچال، فریزر و تانک نیتروژن.. 29
(3-1-2-7) سیستم های استریلیزاسیون شامل اتوکلاو، فور و فیلتر هولدر. 29
(3-1-3) روش کار کشت سلولی.. 29
(3-1-3-2) پاساژ و تکثیر سلول ها 29
(3-1-3-3) ذخیره سازی سلول ها 30
(3-1-3-4) خارج کردن سلول ها از انجماد. 30
(3-1-3-5) شمارش سلولی به روش تریپان بلو. 30
(3-1-3-6) تعیین زمان دو برابر شدن سلول ها 30
(3-2-1) روش جمع آوری اطلاعات... 31
(3-2-2) معرفی آزمون سنجش میکرونکلئی.. 31
(3-2-2-1) آزمون میکرونوکلئی.. 31
(3-2-2-2) مواد مصرفی در آزمون میکرونوکلئی.. 32
(3-2-2-3) تهیه محلول سیتوکلازینB در DMSO... 32
(3-2-2-4) تعیین غلظت مناسب سیتوکلازینB.. 32
(3-2-2-5) زمان بهینه حضور سیتوکلازینB در محیط کشت سلول.. 32
(3-3) مراحل انجام آزمایش.... 33
(3-3-1-1) نحوه تابش سلول ها 33
(3-3-1-2) تهیه نمونه های آزمایش.... 33
(3-3-1-3) تابش دهی و ایجاد اثر همسایگی.. 33
(3-3-1-4) فیکساسیون سلول ها 33
(3-3-1-5) رنگ آمیزی سلول ها 34
(3-3-1-6) مشاهده لام ها به وسیله میکروسکوپ... 35
(3-3-1-7) معیارهای تشخیص سلول دو هسته ای.. 35
(3-3-1-8) معیارهای تشخیص میکرونوکلئی.. 35
(3-3-2) نقش تغییر غلظت محیط کشت انتقالی به سلول های همسایه در ایجاد اثر همسایگی پرتوی.. 35
(3-3-3-2) نحوه تابش سلول ها 37
(3-3-3-3) تهیه نمونه های آزمایش.... 37
(3-3-3-5) تهیه نمونه های آزمایش (اثر غیر مستقیم). 38
(3-3-3-6) تابش دهی و ایجاد اثر همسایگی.. 38
(3-3-4-1) کلونی زایی به عنوان شاخص بقا 39
(3-3-4-2) روش Clonogenic Assay. 39
(3-3-4-3) اننخاب تعداد سلول مناسب برای Colony assay. 40
(3-3-4-4) تعیین تعداد مناسب سلول با توجه به افزایش دز برای انجام Colony assay. 40
(3-3-4-5) تابش دهی و بررسی اثر مستقیم.. 40
(3-3-4-6) تهیه نمونه های آزمایش.... 41
(3-3-4-7) فیکس کردن کلونی ها 41
(3-3-4-9) تابش دهی و بررسی اثر غیر مستقیم.. 41
(3-3-5) تحلیل آماری نتایج.. 41
(4-2) نتایج مربوط به تست های مقدماتی MTT.. 46
(4-2-1) نتایج مربوط به انتخاب تعداد مناسب سلول.. 46
(4-3) نتایج مربوط به تست MTT.. 48
(4-3-1) بررسی درصدبقای سلول های هدف توسط تستMTT در گروه Q-Q... 48
(4-3-2) بررسی درصد بقای سلول های همسایه توسط تست MTT.. 50
(4-4) نتایج مربوط به انتخاب تعداد مناسب سلول QU-DB برایColony assay.. 51
(4-5) نتایج مربوط به تعیین تعداد مناسب سلول با توجه به افزایش دز برای انجام تست کلونی.. 53
(4-6) نتایج مربوط به تستColony assay.. 54
(4-6-1) مرگ میتوزی سلول های هدف... 54
(4-6-2) مرگ میتوزی سلول های همسایه. 56
(4-7) نتایج مربوط به تست میکرونوکلئی.. 58
(4-7-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در گروه Q-Q... 58
(4-7-2) بررسی اثر غلظت کامل محیط کشت تابش دیده در دزهای مختلف پرتوی درگروه Q-Q... 58
(4-7-2-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در دز 600 سانتی گری گروه (Q-Q). 59
(4-7-2-2) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در در دز 800 سانتی گری گروه (Q-Q). 62
(4-7-3) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در گروه(Q-M). 64
(4-7-3-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در در دز 400 سانتی گری گروه (Q-M). 64
(4-8) نمونه هایی از لام های مشاهده شده بوسیله میکروسکوپ... 66
(5-1) برنامه ریزی و چارچوب آزمایش.... 69
(5-2) کاهشی بودن اثر در دز دزهای بالا.. 69
(5-3) مشاهده اثر تابش مستقیم پرتوی بر روی سلول های هدف(Q-Q). 70
(5-3-1) بررسی اثر تابش مستقیم پرتوی با روش MTT.. 70
(5-3-2) بررسی اثر تابش مستقیم پرتوی با روش Colony assay.. 70
(5-4) مشاهده اثر تابش غیر مستقیم پرتوی بر روی سلول های همسایه(Q-Q). 71
(5-4-1) بررسی اثر همسایگی پرتوی (Q-Q)با روش MTT.. 71
(5-4-2) بررسی اثر همسایگی پرتوی (Q-Q) با روش Colony assay.. 71
(5-5) اثر تغییر غلظت محیط کشت تابش دیده. 72
(5-5-3) بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه طبیعی ریه در دز 400 سانتی گری.. 73
(5-6) اثر محیط کشت تابش دیده بدون سلول بر سلول های همسایه. 75
شکل 1‑1( اثرات بیولوژیکی مختلف پرتوی در سلول ها و بافت های تابش ندیده. 5
شکل 1‑2) نقش gap junction و ترشح هورمون ها و پروتئین ها در انتقال اثر همسایگی.. 5
شکل 1‑3) مکانیسم اثر همسایگی پرتوی ناشی از مسیر مولکولی MAPK... 9
شکل 1‑4) خلاصه ای از مسیر مولکولی یون کلسیم در ایجاد اثر همسایگی.. 10
شکل 1‑5) تعداد تغییر بیان ژن ها در حضور جاروب گر NO در محیط کشت... 12
شکل 1‑6) تعداد تغییربیان ژن ها در حضور و عدم حضور جاروب گر ROS در محیط کشت... 13
شکل 3‑1 (اضافه کردن محلول MTT به سلولهای تابش دیده. 37
شکل 3-2): منحنی بقا سلول در دزهای مختلف پرتوی.. 39
شکل3-3): اصول کلی تست کلونی.. 40
نمودار 4‑1) تعیین تعداد مناسب سلول QU-DB برای انجام تست MTT.. 47
نمودار 4‑2 (تعیین تعداد مناسب سلول QU-DB با توجه به شیب منحنی.. 47
شکل 4‑1) تصویری از روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست MTT.. 48
شکل 4‑2) تصویری از روش کار بررسی اثر غیر مستقیم پرتوی توسط تست MTT.. 50
شکل 4‑3 (تصویرکلونی های سلول QU-DB توسط میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی 10 برابر. 53
شکل 4-4 تصویری خلاصه از روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست Colony assay را نشان می دهد. 54
شکل 4‑4 (تصویر روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست Colony assay.. 54
شکل 4‑5 (تصویر بررسی مرگ میتوزی سلول های همسایه با روش Colony assay.. 56
شکل 4‑6 (تصویر روش کار بررسی اثر غلظت های مختلف محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه. 58
نمودار 4‑10 (بررسی اثر غظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه ( (QU-DBدردز 600 سانتی گری.. 61
نمودار 4‑11 (بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه دردز800 سانتی گری.. 63
شکل4-7) نمونه ای از MNسلول های MRC5با بزرگنمایی 40.. 66
شکل4-8) نمونه ای از سلول های QU-DB با بزرگنمایی 40.. 66
جدول 1‑1) موارد اثرگذار در انتقال سیگنال اثر همسایگی پرتوی.. 6
جدول 1‑2 (سیگنال های اثرگذار داخل سلولی.. 8
جدول 4‑1) معرفی تست ها، گروه ها و توضیحات آنها 46
جدول 4‑2 (درصد بقای سلول های هدف Q-Q پس از تابش با دز های متفاوت توسط تست MTT.. 48
جدول 4‑3 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری بقای زیرگروه های تابش.... 49
جدول 4‑4 (درصد بقای سلول های همسایه(Q-Q) پس از تابش با دزهای متفاوت توسط تست MTT.. 50
جدول 4‑5 (مقایسه p-valueحاصل از آزمون آماری بقای زیرگروه های تابش.... 51
جدول 4‑6 (چگونگی تعیین تعداد مناسب سلولQU-DB بر اساس تست پایلوت برای Colony assay.. 52
جدول 4‑7 (انتخاب تعداد مناسب سلول برای انجام تست کلونی در دزهای مختلف.... 53
جدول 4‑10 (بررسی میزان درصد بقا سلول های همسایه پس از تابش دزهای متفاوت با روش Colony assay.. 56
جدول 4‑12 (تعداد MN شمارش شده در زیر گروه های تابش Q-Q... 58
جدول 4‑13 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری مقایسه زیرگروه های تابش گروه Q-Q... 59
جدول 4‑14( بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده در دز 600 سانتی گری بر سلول های همسایه گروه Q-Q... 60
جدول 4‑16 (بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده دردز 800 سانتی گری بر سلول های QU-DB... 62
رساله با عنوان ارزیابی پاسخ-دز اثر همسایگی پرتوی در دو رده سلول طبیعی و توموری ریه دردزهای بالای پرتوی یونیزان
