رساله با عنوان ارزیابی پاسخ-دز اثر همسایگی پرتوی در دو رده سلول طبیعی و توموری ریه دردزهای بالای پرتوی یونیزان

اختصاصی از رزفایل رساله با عنوان ارزیابی پاسخ-دز اثر همسایگی پرتوی در دو رده سلول طبیعی و توموری ریه دردزهای بالای پرتوی یونیزان دانلود با لینک مستقیم و پر سرعت .

85 صفحه ورد شامل

(1) فصل اول: 1

(1-1) پیشگفتار. 1

(1-2) کلیات... 4

(1-2-1) اثر همسایگی پرتوی.. 4

(1-2-2) مکانیسم اثر همسایگی پرتوی.. 5

(1-2-2-1) نقش GJIC در انتقال پیام های همسایگی.. 6

(1-2-2-2) متابولیسم های اکسیداسیون.. 6

(1-2-2-3) مسیر مولکولی MAPK ، سایتوکین ها و عوامل رشد.. 7

(1-2-2-4) شار کلسیم.. 9

(1-2-2-5) تغییرات مولکولی ایجاد شده در سلول به دنبال تابش پرتوی یونیزان.. 10

(1-2-2-6) تغییرات بیان ژنی.. 11

(1-3) رادیوتراپی.. 13

(1-3-1) پرتودرمانی و اثر همسایگی.. 13

(1-4) حفاظت پرتوی و اثر همسایگی.. 15

(2) فصل دوم: 17

(2-1) نوع سلول مورد بررسی.. 19

(2-1-1) مطالعاتی که در آنها کاهش اثر همسایگی با افزایش دز مشاهده شده است. 20

(2-1-2) نقش تغییر غلظت محیط کشت تابشی در ایجاد اثر همسایگی پرتوی.. 20

(3) فصل سوم: 23

(3-1) کشت سلولی.. 25

(3-1-1) مواد مصرفی.. 25

(3-1-1-1) رده سلولی QU-DB.. 25

(3-1-1-2) رده سلولی MRC5.. 25

(3-1-1-3) محیط کشت سلولی.. 25

(3-1-1-4) نحوه تهیه محیط کشت... 25

(3-1-1-5) نحوه تهیه محیط کشتDMEM... 26

(3-1-1-6) (FBS) Fetal Bovine Serum... 26

(3-1-1-7) آنتی بیوتیک..... 26

(3-1-1-8) ال-گلوتامین.. 26

(3-1-1-9) تریپسین - EDTA.. 26

(3-1-1-10) بافر. 27

(3-1-1-11) تریپان بلو. 27

(3-1-1-12) فریزینگ مدیوم. 27

(3-1-1-13) دی متیل سولفوکساید(DMSO). 27

(3-1-1-14) فلاسک کشت سلولی.. 27

(3-1-1-15) فیلتر سرنگی.. 27

(3-1-2) وسایل و تجهیزات... 28

(3-1-2-1) هود لامینار. 28

(3-1-2-2) انکوباتور. 28

(3-1-2-3) سانتریفیوژ. 28

(3-1-2-4) لام نئوبار. 28

(3-1-2-5) میکروسکوپ... 28

(3-1-2-6) سیستم های خنک کننده شامل یخچال، فریزر و تانک نیتروژن.. 29

(3-1-2-7) سیستم های استریلیزاسیون شامل اتوکلاو، فور و فیلتر هولدر. 29

(3-1-3) روش کار کشت سلولی.. 29

(3-1-3-1) تهیه سلول.. 29

(3-1-3-2) پاساژ و تکثیر سلول ها 29

(3-1-3-3) ذخیره سازی سلول ها 30

(3-1-3-4) خارج کردن سلول ها از انجماد. 30

(3-1-3-5) شمارش سلولی به روش تریپان بلو. 30

(3-1-3-6) تعیین زمان دو برابر شدن سلول ها 30

(3-2) روش کار. 31

(3-2-1) روش جمع آوری اطلاعات... 31

(3-2-2) معرفی آزمون سنجش میکرونکلئی.. 31

(3-2-2-1) آزمون میکرونوکلئی.. 31

(3-2-2-2) مواد مصرفی در آزمون میکرونوکلئی.. 32

(3-2-2-2-1)سیتوکلایزین B.. 32

(3-2-2-3) تهیه محلول سیتوکلازینB در DMSO... 32

(3-2-2-4) تعیین غلظت مناسب سیتوکلازینB.. 32

(3-2-2-5) زمان بهینه حضور سیتوکلازینB در محیط کشت سلول.. 32

(3-3) مراحل انجام آزمایش.... 33

(3-3-1) تابش دهی.. 33

(3-3-1-1) نحوه تابش سلول ها 33

(3-3-1-2) تهیه نمونه های آزمایش.... 33

(3-3-1-3) تابش دهی و ایجاد اثر همسایگی.. 33

(3-3-1-4) فیکساسیون سلول ها 33

(3-3-1-5) رنگ آمیزی سلول ها 34

(3-3-1-6) مشاهده لام ها به وسیله میکروسکوپ... 35

(3-3-1-7) معیارهای تشخیص سلول دو هسته ای.. 35

(3-3-1-8) معیارهای تشخیص میکرونوکلئی.. 35

(3-3-2) نقش تغییر غلظت محیط کشت انتقالی به سلول های همسایه در ایجاد اثر همسایگی پرتوی.. 35

(3-3-3) تست MTT.. 36

(3-3-3-1) اساس تست MTT.. 36

(3-3-3-2) نحوه تابش سلول ها 37

(3-3-3-3) تهیه نمونه های آزمایش.... 37

(3-3-3-4) افزودن MTT.. 38

(3-3-3-5) تهیه نمونه های آزمایش (اثر غیر مستقیم). 38

(3-3-3-6) تابش دهی و ایجاد اثر همسایگی.. 38

(3-3-4) تست کلونی.. 39

(3-3-4-1) کلونی زایی به عنوان شاخص بقا 39

(3-3-4-2) روش Clonogenic Assay. 39

(3-3-4-3) اننخاب تعداد سلول مناسب برای Colony assay. 40

(3-3-4-4) تعیین تعداد مناسب سلول با توجه به افزایش دز برای انجام Colony assay. 40

(3-3-4-5) تابش دهی و بررسی اثر مستقیم.. 40

(3-3-4-6) تهیه نمونه های آزمایش.... 41

(3-3-4-7) فیکس کردن کلونی ها 41

(3-3-4-8) رنگ آمیزی.. 41

(3-3-4-9) تابش دهی و بررسی اثر غیر مستقیم.. 41

(3-3-5) تحلیل آماری نتایج.. 41

(4) فصل چهارم: 43

(4-1) مقدمه. 45

(4-2) نتایج مربوط به تست های مقدماتی MTT.. 46

(4-2-1) نتایج مربوط به انتخاب تعداد مناسب سلول.. 46

(4-2-2) نتایج مربوط به تعیین مدت زمان مناسب جهت انکوباسیون سلول ها در اثر مستقیم و همسایگی پرتوی.. 48

(4-3) نتایج مربوط به تست MTT.. 48

(4-3-1) بررسی درصدبقای سلول های هدف توسط تستMTT در گروه Q-Q... 48

(4-3-2) بررسی درصد بقای سلول های همسایه توسط تست MTT.. 50

(4-4) نتایج مربوط به انتخاب تعداد مناسب سلول QU-DB برایColony assay.. 51

(4-5) نتایج مربوط به تعیین تعداد مناسب سلول با توجه به افزایش دز برای انجام تست کلونی.. 53

(4-6) نتایج مربوط به تستColony assay.. 54

(4-6-1) مرگ میتوزی سلول های هدف... 54

(4-6-2) مرگ میتوزی سلول های همسایه. 56

(4-7) نتایج مربوط به تست میکرونوکلئی.. 58

(4-7-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در گروه Q-Q... 58

(4-7-2) بررسی اثر غلظت کامل محیط کشت تابش دیده در دزهای مختلف پرتوی درگروه Q-Q... 58

(4-7-2-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در دز 600 سانتی گری گروه (Q-Q). 59

(4-7-2-2) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در در دز 800 سانتی گری گروه (Q-Q). 62

(4-7-3) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در گروه(Q-M). 64

(4-7-3-1) نتایج مربوط به بررسی اثر غلظت در در دز 400 سانتی گری گروه (Q-M). 64

(4-8) نمونه هایی از لام های مشاهده شده بوسیله میکروسکوپ... 66

(5) فصل پنجم: 67

(5-1) برنامه ریزی و چارچوب آزمایش.... 69

(5-2) کاهشی بودن اثر در دز دزهای بالا.. 69

(5-3) مشاهده اثر تابش مستقیم پرتوی بر روی سلول های هدف(Q-Q). 70

(5-3-1) بررسی اثر تابش مستقیم پرتوی با روش MTT.. 70

(5-3-2) بررسی اثر تابش مستقیم پرتوی با روش Colony assay.. 70

(5-4) مشاهده اثر تابش غیر مستقیم پرتوی بر روی سلول های همسایه(Q-Q). 71

(5-4-1) بررسی اثر همسایگی پرتوی (Q-Q)با روش MTT.. 71

(5-4-2) بررسی اثر همسایگی پرتوی (Q-Q) با روش Colony assay.. 71

(5-5) اثر تغییر غلظت محیط کشت تابش دیده. 72

(5-5-1) بررسی اثرتغییر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه توموری ریه در دز 600 سانتی گری(Q-Q). 72

(5-5-2) بررسی اثر تغییر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه توموری ریه در دز 800 سانتی گری(Q-Q). 73

(5-5-3) بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه طبیعی ریه در دز 400 سانتی گری.. 73

(5-6) اثر محیط کشت تابش دیده بدون سلول بر سلول های همسایه. 75

(5-7) نتیجه گیری.. 76

(5-8)پیشنهادات... 77

(6) فصل ششم.. 79

شکل ‏1‑1( اثرات بیولوژیکی مختلف پرتوی در سلول ها و بافت های تابش ندیده. 5

شکل ‏1‑2) نقش gap junction و ترشح هورمون ها و پروتئین ها در انتقال اثر همسایگی.. 5

شکل ‏1‑3) مکانیسم اثر همسایگی پرتوی ناشی از مسیر مولکولی MAPK... 9

شکل ‏1‑4) خلاصه ای از مسیر مولکولی یون کلسیم در ایجاد اثر همسایگی.. 10

شکل ‏1‑5) تعداد تغییر بیان ژن ها در حضور جاروب گر NO در محیط کشت... 12

شکل ‏1‑6) تعداد تغییربیان ژن ها در حضور و عدم حضور جاروب گر ROS در محیط کشت... 13

نمودار 2-1( بقای سلولی در سلول همسایه HPV-G در اثر انتقال محیط کشت سلول های مختلف هدف با غلظت های مختلف .■ مربوط به تابش دهی5 گری □ گروه کنترل مربوط به تابش دهی 5/0 گری.. 21

شکل ‏3‑1 (اضافه کردن محلول MTT به سلولهای تابش دیده. 37

شکل 3-2): منحنی بقا سلول در دزهای مختلف پرتوی.. 39

شکل3-3): اصول کلی تست کلونی.. 40

نمودار ‏4‑1) تعیین تعداد مناسب سلول QU-DB برای انجام تست MTT.. 47

نمودار ‏4‑2 (تعیین تعداد مناسب سلول QU-DB با توجه به شیب منحنی.. 47

شکل ‏4‑1) تصویری از روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست MTT.. 48

نمودار ‏4‑3 (درصد بقای به دست آمده در تمام زیر گروه های Q-Q، Error bar معرف ± انحراف معیار می باشد. 49

در گروه Q-Qشکل 4-2 تصویری از خلاصه روش کار بررسی اثر غیر مستقیم پرتوی در گروه Q-Q توسط تست MTT می باشد. 50

شکل ‏4‑2) تصویری از روش کار بررسی اثر غیر مستقیم پرتوی توسط تست MTT.. 50

نمودار ‏4‑4( درصد بقای به دست آمده در تمامی زیر گروه های Q-Q، Error bar معرف ± انحراف معیار می باشد.(مقایسه دو اثر مستقیم وغیر مستقیم پرتوی). 51

نمودار ‏4‑5 (میانگین تعداد کلونی به دست آمده در غلظت های متفاوت سلولی، Error bar معرف ± انحراف معیار می باشد. 52

نمودار ‏4‑6 (درصد بازده کشت به دست آمده در غلظت های متفاوت سلولی، Error bar معرف ± انحراف معیار می باشد. 53

شکل ‏4‑3 (تصویرکلونی های سلول QU-DB توسط میکروسکوپ نوری با بزرگنمایی 10 برابر. 53

شکل 4-4 تصویری خلاصه از روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست Colony assay را نشان می دهد. 54

شکل ‏4‑4 (تصویر روش کار بررسی اثر مستقیم پرتوی توسط تست Colony assay.. 54

نمودار ‏4‑7 (درصد بقا و بازده کشت به دست آمده در تمام زیر گروه های Q-Q، Error bar معرف ± انحراف معیارمی باشد. 55

شکل ‏4‑5 (تصویر بررسی مرگ میتوزی سلول های همسایه با روش Colony assay.. 56

نمودار ‏4‑8 (درصد بقا و درصد بازده کشت به دست آمده در تمامی زیر گروه های Q-Q،Error bar معرف ± انحراف معیارمی باشد. 57

شکل ‏4‑6 (تصویر روش کار بررسی اثر غلظت های مختلف محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه. 58

نمودار ‏4‑9 (میانگین MN شمارش شده در زیر گروه های تابش Q-Q، Error bar معرف ± انحراف معیار می باشد. 59

نمودار ‏4‑10 (بررسی اثر غظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه ( (QU-DBدردز 600 سانتی گری.. 61

نمودار ‏4‑11 (بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه دردز800 سانتی گری.. 63

نمودار ‏4‑12 (بررسی اثر غلظت های متفاوت محیط کشت تابش دیده بر سلول های همسایه MRC5 دردز 400 سانتی گری.. 65

شکل4-7) نمونه ای از MNسلول های MRC5با بزرگنمایی 40.. 66

شکل4-8) نمونه ای از سلول های QU-DB با بزرگنمایی 40.. 66

جدول ‏1‑1) موارد اثرگذار در انتقال سیگنال اثر همسایگی پرتوی.. 6

جدول ‏1‑2 (سیگنال های اثرگذار داخل سلولی.. 8

جدول ‏4‑1) معرفی تست ها، گروه ها و توضیحات آنها 46

جدول ‏4‑2 (درصد بقای سلول های هدف Q-Q پس از تابش با دز های متفاوت توسط تست MTT.. 48

جدول ‏4‑3 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری بقای زیرگروه های تابش.... 49

جدول ‏4‑4 (درصد بقای سلول های همسایه(Q-Q) پس از تابش با دزهای متفاوت توسط تست MTT.. 50

جدول ‏4‑5 (مقایسه p-valueحاصل از آزمون آماری بقای زیرگروه های تابش.... 51

جدول ‏4‑6 (چگونگی تعیین تعداد مناسب سلولQU-DB بر اساس تست پایلوت برای Colony assay.. 52

جدول ‏4‑7 (انتخاب تعداد مناسب سلول برای انجام تست کلونی در دزهای مختلف.... 53

جدول ‏4‑8 (بررسی میزان مرگ میتوزی سلول های هدف QU-DBپس از تابش با دزهای متفاوت به روش Colony assay.. 54

جدول ‏4‑9 (مقایسه p-value حاصل از میزان مرگ میتوزی سلول های هدف پس از تابش پرتوی یونیزان با روش Colony assay.. 55

جدول ‏4‑10 (بررسی میزان درصد بقا سلول های همسایه پس از تابش دزهای متفاوت با روش Colony assay.. 56

جدول ‏4‑11 (مقایسه p-value ناشی از میزان مرگ میتوزی سلول های همسایه پس از تابش با روش Colony assay.. 57

جدول ‏4‑12 (تعداد MN شمارش شده در زیر گروه های تابش Q-Q... 58

جدول ‏4‑13 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری مقایسه زیرگروه های تابش گروه Q-Q... 59

جدول ‏4‑14( بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده در دز 600 سانتی گری بر سلول های همسایه گروه Q-Q... 60

جدول ‏4‑15 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری مقایسه غلظت های مختلف محیط کشت تابش دیده در دز 600 سانتی گری.. 60

جدول ‏4‑16 (بررسی اثر غلظت محیط کشت تابش دیده دردز 800 سانتی گری بر سلول های QU-DB... 62

جدول ‏4‑17 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری غلظت های مختلف محیط کشت تابش دیده در دز 800 سانتی گری.. 63

جدول ‏4‑18 (بررسی اثر غلظت های متفاوت محیط کشت تابش دیده دردز 400 سانتی گری بر سلول های همسایه MRC5.. 64

جدول ‏4‑19 (مقایسه p-value حاصل از آزمون آماری غلظت های مختلف محیط کشت تابش دیده در دز 400 سانتی گری.. 65